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細(xì)胞不貼壁?可能是因?yàn)檫@些

瀏覽數(shù)量: 0     作者: 本站編輯     發(fā)布時(shí)間: 2024-05-15      來(lái)源: 本站

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細(xì)胞不貼壁?可能是因?yàn)檫@些

在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中,細(xì)胞不貼壁是一個(gè)常見(jiàn)且令人困擾的問(wèn)題,它往往會(huì)給實(shí)驗(yàn)帶來(lái)諸多不便,影響實(shí)驗(yàn)進(jìn)行和結(jié)果的準(zhǔn)確性。當(dāng)遇到細(xì)胞不貼壁的情況時(shí),我們可以從以下幾個(gè)方面入手,排查不貼壁的原因并找尋相對(duì)應(yīng)的解決方案。


圖片
▲貼壁細(xì)胞培養(yǎng)


01 細(xì)胞不貼壁的原因及解決方法


胰蛋白酶消化過(guò)度


胰酶處理時(shí)間過(guò)長(zhǎng),可能導(dǎo)致細(xì)胞膜蛋白受損,影響細(xì)胞貼壁;

解決方法:調(diào)整消化時(shí)間,縮短胰蛋白酶消化時(shí)間或降低其濃度,以減少細(xì)胞膜蛋白受損。


微生物污染


支原體感染或其他微生物污染會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞功能紊亂,影響貼壁能力;

解決方法:分離培養(yǎng)物,檢測(cè)支原體。如果發(fā)現(xiàn)支原體污染,應(yīng)丟棄培養(yǎng)物。

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培養(yǎng)基pH值過(guò)堿


培養(yǎng)基pH值過(guò)高,可能導(dǎo)致細(xì)胞不適應(yīng),影響貼壁;

解決方法:使用無(wú)菌醋酸溶液,調(diào)整pH值或充入無(wú)菌CO?以維持適宜的pH環(huán)境。


細(xì)胞老化


細(xì)胞傳代次數(shù)過(guò)多,可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞老化,失去貼附性;

解決方法:復(fù)蘇新的細(xì)胞,使用20%血清幫助細(xì)胞復(fù)原并注意傳代接種的細(xì)胞密度和時(shí)機(jī)。


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接種細(xì)胞起始濃度不當(dāng)

細(xì)胞接種量過(guò)低或過(guò)高,可能無(wú)法形成有效的細(xì)胞外基質(zhì),影響貼壁;

解決方法:改變培養(yǎng)液成分,使用含有促貼壁因子的培養(yǎng)基。


02 如何判斷細(xì)胞是否受污染

看培養(yǎng)基的濁度和顏色變化


細(xì)菌和真菌污染通常會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)基迅速變渾濁,顏色也會(huì)發(fā)生變化。


鏡下觀察


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用細(xì)胞間配置的顯微鏡可以觀察到細(xì)菌和真菌的結(jié)構(gòu),有助于早期發(fā)現(xiàn)微生物污染。


培養(yǎng)基中的異味


某些微生物污染會(huì)產(chǎn)生易察覺(jué)的特殊氣味,這可以幫助檢測(cè)污染。


03 注意事項(xiàng)


在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,必須嚴(yán)格遵循無(wú)菌操作技術(shù),以防細(xì)胞遭受污染。要使用新鮮且質(zhì)量達(dá)標(biāo)的培養(yǎng)基及細(xì)胞株,以此來(lái)降低污染出現(xiàn)的可能性。還需要定期對(duì)細(xì)胞狀態(tài)進(jìn)行檢查,如有需要,應(yīng)及時(shí)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代或處理異常細(xì)胞。


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